पॉलीएक्रिलामाइड जेल वैद्युतकणसंचलन के लिए सावधानियां

· polyacrylamideजेल को एक्रिलामाइड मोनोमर, पोलीमराइजेशन प्रारंभिक सामग्री, उत्प्रेरक, और नमक और बफर मिश्रण के अधिकार के साथ एक साथ होना चाहिए।

· एक्रिलामाइडऔर बीआईएस (एन, एन'- मेथीलीन डबल एक्रिलामाइड) मोनोमर फॉर्म जेल मैट्रिक्स है।

· अमोनियम परसल्फेट चिपकने वाला बहुलकीकरण प्रक्रिया शुरू करता है। गोंद के निर्माण के लिए पानी में तैयार 10% अमोनियम परसल्फेट घोल की आवश्यकता होती है। अधिकांश जानकारी ने सक्रिय उपयोग की आवश्यकता का संकेत दिया। हालाँकि, 10% घोल को गतिविधि के महत्वपूर्ण नुकसान के बिना कई हफ्तों तक 4℃ पर रखा जा सकता है। 10 मिलीलीटर तक बनायें और जब गोंद एकत्र न हो जाए तो त्याग दें।

टिप: प्रतिशतएक्रिलामाइडअनुक्रमण गोंद और प्रोटीन गोंद में एक ही बात नहीं है। यदि पहले से तैयार एक्रिलामाइड: बीआईएस समाधान का उपयोग कर रहे हैं, तो सही बोतल लेना सुनिश्चित करें।

· TEMED (N, N, N ', N '- टेट्रामेथिल एथिलीनडायमाइन) एक उत्प्रेरक है, जिसे भूरे रंग की बोतल में भरकर फ्रिज में रख दें। गोंद डालने से ठीक पहले डालें।

· इलेक्ट्रोफोरेसिस में इस्तेमाल किए गए पॉलीएक्रिलामाइड इलेक्ट्रोफोरेसिस ग्लास को हर बार पहले और बाद में धोना चाहिए। इलेक्ट्रोफोरेसिस के बाद, गर्म साबुन के पानी में नरम ब्रश और कपड़े से धोएँ, आसुत जल से कुल्ला करें और सूखने के लिए छोड़ दें।

· नमी और धूल खोखले पॉलीमर के कारण हो सकते हैं। इलेक्ट्रोफोरेसिस से पहले, ग्लास प्लेट को ग्लास क्लीनर से साफ करें और इसे नरम ब्रश से पोंछ लें। आसुत जल से धोएँ और पेपर वाइप से अच्छी तरह सुखाएँ। कागज़ से पोंछने से पहले 70% इथेनॉल से धोना साफ करने और सुखाने में तेज़ी लाने में मदद करता है। एक्रिलामाइड के नमूने क्रमिक रूप से डालें: BIS, पानी, बफर घोल, अमोनियम परसल्फेट, TEMED। अच्छी तरह हिलाएँ और तुरंत डालें।

पॉलीमराइजेशन से पहले पॉलीऐक्रेलामाइड को गैस मुक्त करना आवश्यक नहीं है। (ऐक्रेलामाइड को बुलबुले हटाने के लिए निर्वात में रखा जाता था, क्योंकि ऑक्सीजन पॉलीमराइजेशन को बाधित करता है।)

क्षैतिज गोंद बिंदु नमूना युक्तियाँ.

· नीचे वाले बॉक्स में काले कागज का एक टुकड़ा रखें, और अधिक स्पष्टता से देखने के लिए काले रंग की पृष्ठभूमि पर कुछ नमूना छेद बनाएं।
· गोंद टैंक भरा बफर, कोलाइड के ठीक ऊपर।
· अगर किनारे पर लाइट है, तो लाइट जला दें, कोलाइड पर लाइट चमकने दें। सैंपल को पिपेट में डालें।
· स्वचालित पाइपिंग डिवाइस का उपयोग करना.
· 10-200 म्यू में 1 द्रव गतिमान बिंदु का उपयोग नमूने के अधिकांश बिंदुओं में किया जा सकता है। बहुत छोटे नमूना छिद्रों (10μ1 से कम) के लिए, अनुक्रमण गोंद के लिए उपयोग किया जाने वाला लंबा पिपेट सिर अधिक सुविधाजनक है।

· पाइपिंग को सैंपल में डुबोकर धीरे-धीरे बहते तरल पदार्थ को अंदर लेना। सैंपल ग्लिसरीन से चिपचिपा लग सकता है, और तेजी से पंप करने से पिपेट हेड में हवा के बुलबुले आ सकते हैं।

· पाइपिंग हेड को सांस के साथ अंदर लेने के बाद, तरल पदार्थ के सिर को पाइप के किनारे पर धीरे से घुमाएं या पोंछने वाले कागज़ से तरल पदार्थ के सिर को बूंदों के बाहर चूसें। ध्यान रखें कि नमूना चूसना न हो।

नमूना को नमूना छेद में रखें

· पाइपिंग डिवाइस थोड़ा दबाव रखने के लिए, नमूने थोड़ा अतिप्रवाह तरल सिर ले जाएँ।
· बफ़र में डाला गया पाइपिंग हेड, स्पॉट होल से थोड़ा ऊपर, सकारात्मक दबाव बनाए रखता है। पिपेट की नोक को एक छोटे छेद में डाला जा सकता है।
· धीरे-धीरे और स्थिर रूप से नमूने बाहर निकालें। पिपेट टिप को पॉइंट सैंपल छेद के ऊपर रखा जाता है, और नमूना छेद में डूब जाएगा। नमूने को अंदर धकेलने के बजाय नमूना छेद को भरने के लिए डूबने दें।
· एक बार तरल सिर के साथ नमूने की आखिरी बूंद, तरल दूसरे पैर में चला जाएगा, धीरे-धीरे तरल चाल बढ़ाएं, बफर से बाहर निकलें

ऊर्ध्वाधर गोंद नमूनाकरण कैसे करें?

· कांच के दो टुकड़ों के बीच बने ऊर्ध्वाधर गोंद बिंदु नमूना छेद। बहुत पतले गोंद में, पिपेट हेड को दो कांच की प्लेटों के बीच भी नहीं डाला जा सकता है। ग्लिसरीन पर नज़र रखें! पिपेट हेड को सैंपल छेद पर रखें और सैंपल छेद में डूब जाएगा।
· नमूना लेने से पहले, पॉलीप्रोपाइलीन एसाइल जेल के ऊर्ध्वाधर बिंदु को साफ करना सुनिश्चित करें। नमूना छेद के तल पर दिखाई देने वाले अनपॉलीमराइज्ड एक्रिलामाइड और पानी को धो लें। पानी नमूना छेद को काफी छोटा कर सकता है। 25ml या 50ml सिरिंज और 18-गेज सुई का उपयोग करें। इलेक्ट्रोफोरेसिस बफर में डालें और नमूना छेद को सावधानी से फ्लश करें।
· सैंपल में छेद देखना मुश्किल हो सकता है, लेकिन बाकी सब आसान है। अगर छेद ज़्यादा हैं, तो सैंपल बफर को ब्रोमोफेनॉल ब्लू से जांचा जा सकता है।