पॉलीएक्रिलामाइड जेल वैद्युतकणसंचलन के लिए सावधानियां

· polyacrylamideजेल को एक्रिलामाइड मोनोमर, पोलीमराइजेशन प्रारंभिक सामग्री, उत्प्रेरक, और नमक और बफर मिश्रण का अधिकार एक साथ होना चाहिए।

· एक्रिलामाइडऔर बीआईएस (एन, एन '- मेथिलीन डबल एक्रिलामाइड) मोनोमर फॉर्म जेल मैट्रिक्स है।

· अमोनियम पर्सल्फेट चिपकने वाली पोलीमराइजेशन प्रक्रिया शुरू करता है। गोंद के निर्माण के लिए पानी में तैयार 10% अमोनियम परसल्फेट घोल की आवश्यकता होती है। अधिकांश जानकारी सक्रिय उपयोग की आवश्यकता का संकेत देती है। हालाँकि, 10% समाधान को गतिविधि के महत्वपूर्ण नुकसान के बिना कई हफ्तों तक 4℃ पर रखा जा सकता है। 10 मिलीलीटर तक बनाएं और जब गोंद एकत्रित न हो जाए तो हटा दें।

युक्ति: का प्रतिशतएक्रिलामाइडअनुक्रमण में गोंद और प्रोटीन गोंद समान नहीं है। यदि पूर्वनिर्मित एक्रिलामाइड: बीआईएस समाधान का उपयोग कर रहे हैं, तो सुनिश्चित करें कि आप सही बोतल लें।

· TEMED (एन, एन, एन ', एन' - टेट्रामिथाइल एथिलीनडायमाइन) एक उत्प्रेरक है, जिसे भूरे रंग की बोतल में रेफ्रिजरेटर में रखा जाता है। गोंद डालने से ठीक पहले जोड़ें.

· पॉलीएक्रिलामाइड वैद्युतकणसंचलन में प्रयुक्त ग्लास को हर बार पहले और बाद में धोना चाहिए। वैद्युतकणसंचलन के बाद, मुलायम ब्रश और कपड़े से गर्म साबुन वाले पानी में धोएं, आसुत जल से धोएं और सूखने के लिए रख दें।

· खोखले पॉलिमर से नमी और धूल पैदा हो सकती है। इलेक्ट्रोफोरेसिस से पहले कांच की प्लेट को ग्लास क्लीनर से साफ करें और मुलायम ब्रश से पोंछ लें। आसुत जल से धोएं और पेपर वाइप से अच्छी तरह सुखा लें। कागज से पोंछने से पहले 70% इथेनॉल से धोने से साफ करने और सूखने में तेजी लाने में मदद मिलती है। एक्रिलामाइड के नमूने क्रमिक रूप से जोड़ें: बीआईएस, पानी, बफर समाधान, अमोनियम परसल्फेट, टीईएमईडी। अच्छे से हिलाएं और तुरंत डालें।

पोलीमराइजेशन से पहले पॉलीएक्रिलामाइड को डीगैस करना आवश्यक नहीं है। (एक्रिलामाइड को बुलबुले हटाने के लिए वैक्यूम में रखा जाता था क्योंकि ऑक्सीजन पोलीमराइजेशन को रोकता है।)

क्षैतिज गोंद बिंदु नमूना युक्तियाँ।

· अधिक स्पष्ट रूप से देखने के लिए कुछ नमूना छेद बनाने के लिए निचले बॉक्स में काले कागज का एक टुकड़ा, काली पृष्ठभूमि रखें।
· गोंद टैंक भरा हुआ बफर, कोलाइड के ठीक ऊपर।
· यदि किनारे पर रोशनी है, तो रोशनी चालू करें, प्रकाश को कोलाइड की तरह चमकने दें। नमूना को पिपेट में डालें।
· स्वचालित पिपेटिंग डिवाइस का उपयोग करना।
· 10-200 म्यू में 1 तरल गतिमान बिंदु का उपयोग नमूने के अधिकांश बिंदुओं में किया जा सकता है। बहुत छोटे नमूना छेद (10μ1 से कम) के लिए, गोंद को अनुक्रमित करने के लिए उपयोग किया जाने वाला लंबा पिपेट सिर अधिक सुविधाजनक है।

· पिपेटिंग बस नमूने में डूबी हुई है, धीरे-धीरे चलने वाले तरल पदार्थ को अंदर लेती है। नमूना ग्लिसरीन के साथ चिपचिपा दिखाई दे सकता है, और तेजी से पंप करने से पिपेट सिर में हवा के बुलबुले आ सकते हैं।

· पाइपिंग हेड को अंदर लेने के बाद नमूने, तरल पदार्थ के सिर को पाइप के किनारे पर धीरे से घुमाएंगे या कागज़ को पोंछते हुए बूंदों के बाहर तरल सिर को चूसेंगे। सावधान रहें कि नमूना न चूसें।

नमूना को नमूना छेद में रखें

· पिपेटिंग डिवाइस थोड़ा दबाव बनाए रखने के लिए, नमूनों को थोड़ा अतिप्रवाह तरल सिर को हिलाएं।
· पाइपिंग हेड को बफ़र में डाला जाता है, स्पॉट होल से थोड़ा ऊपर, सकारात्मक दबाव बनाए रखता है। पिपेट की नोक को एक छोटे छेद में डाला जा सकता है।
· धीरे-धीरे और लगातार नमूने बाहर। पिपेट टिप को बिंदु नमूना छेद के ऊपर रखा गया है, और नमूना छेद में डूब जाएगा। नमूना छेद को भरने के लिए नमूने को अंदर धकेलने के बजाय डूबने दें।
· तरल शीर्ष के साथ नमूने की आखिरी बूंद के बाद, तरल दूसरे चरण में चला जाएगा, धीरे-धीरे तरल चाल बढ़ाएं, बफर से बाहर निकलें

ऊर्ध्वाधर गोंद नमूनाकरण कैसे करें?

· कांच के दो टुकड़ों के बीच बने ऊर्ध्वाधर गोंद बिंदु नमूना छेद। बहुत पतले गोंद में, पिपेट हेड को दो ग्लास प्लेटों के बीच भी नहीं डाला जा सकता है। ग्लिसरीन देखो! पिपेट हेड को नमूना छेद के ऊपर रखें और नमूना छेद में डूब जाएगा।
· बिंदु नमूना से पहले, पॉलीप्रोपाइलीन एसाइल जेल नमूना छेद के ऊर्ध्वाधर बिंदु को साफ करना सुनिश्चित करें। अनपॉलीमराइज़्ड एक्रिलामाइड और पानी को धो लें जो नमूना छेद के नीचे दिखाई दे सकता है। पानी नमूना छेद को काफी छोटा कर सकता है। 25ml या 50ml सिरिंज और 18-गेज सुई का उपयोग करें। इलेक्ट्रोफोरेसिस बफर में डालें और नमूना छेद को सावधानीपूर्वक फ्लश करें।
· नमूना छेद को देखना मुश्किल हो सकता है, लेकिन साथ ही, बाकी सब आसान है। यदि अतिरिक्त छेद हैं, तो नमूना बफर का परीक्षण ब्रोमोफेनॉल ब्लू से किया जा सकता है।