पॉलीक्रैलेमाइड जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस के लिए सावधानियां

· polyacrylamideजेल एक्रिलामाइड मोनोमर, पोलीमराइजेशन स्टार्टिंग स्टार्टिंग मटीरियल, कैटालिस्ट, और नमक और बफर मिश्रण के अधिकार से एक साथ होना चाहिए।

· एक्रिलामाइडऔर बीआईएस (एन, एन '- मेथिलीन डबल एक्रिलामाइड) मोनोमर फॉर्म जेल मैट्रिक्स है।

· अमोनियम persulfate चिपकने वाला पोलीमराइजेशन प्रक्रिया शुरू करता है। गोंद के निर्माण के लिए पानी में तैयार 10% अमोनियम पर्सल्फेट समाधान की आवश्यकता होती है। अधिकांश जानकारी ने सक्रिय उपयोग की आवश्यकता का संकेत दिया। हालांकि, 10% समाधान को गतिविधि के महत्वपूर्ण नुकसान के बिना कई हफ्तों के लिए 4 ℃ पर रखा जा सकता है। 10 एमएल तक मेक करें और जब गोंद एकत्र करने में विफल हो जाए तो त्यागें।

टिप: का प्रतिशतएक्रिलामाइडअनुक्रमण में गोंद और प्रोटीन गोंद समान नहीं है। यदि प्रीमैड एक्रिलामाइड: बीआईएस समाधान का उपयोग कर रहे हैं, तो सही बोतल प्राप्त करना सुनिश्चित करें।

· टेम्पेड (एन, एन, एन ', एन'- टेट्रामेथाइल एथिलेनडामाइन) एक उत्प्रेरक है, एक भूरे रंग की बोतल में, रेफ्रिजरेटर में रखा गया है। गोंद डालने से पहले जोड़ें।

· पॉलीक्रैलेमाइड वैद्युतकणसंचलन वैद्युतकणसंचलन में इस्तेमाल किया जाने वाला ग्लास वैद्युतकणसंचलन में हर बार और बाद में धोया जाना चाहिए। वैद्युतकणसंचलन के बाद, गर्म साबुन के पानी में एक नरम ब्रश और कपड़े से धोएं, आसुत जल से कुल्ला करें और सूखने के लिए खड़े हों।

· नमी और धूल खोखले बहुलक के साथ हो सकती है। वैद्युतकणसंचलन से पहले, ग्लास प्लेट को ग्लास क्लीनर से साफ करें और इसे नरम ब्रश से पोंछ लें। डिस्टिल्ड पानी से धोएं और एक पेपर वाइप के साथ अच्छी तरह से सूखें। कागज के साथ पोंछने से पहले 70% इथेनॉल के साथ rinsing, सूखने को साफ करने और गति देने में मदद करता है। क्रमिक रूप से एक्रिलामाइड के नमूने जोड़ें: बीआईएस, पानी, बफर समाधान, अमोनियम पर्सल्फेट, टेम्पेड। अच्छी तरह से हिलाओ और तुरंत डालो।

पोलीमराइजेशन से पहले पॉलीक्रिलामाइड को कम करना आवश्यक नहीं है। (एक्रिलामाइड को बुलबुले को हटाने के लिए एक वैक्यूम में रखा जाता था क्योंकि ऑक्सीजन पोलीमराइजेशन को रोकता है।)

क्षैतिज गोंद बिंदु नमूना युक्तियाँ।

· नीचे बॉक्स में काले कागज का एक टुकड़ा डालें, अधिक स्पष्ट रूप से देखने के लिए कुछ नमूना छेद बनाने के लिए काली पृष्ठभूमि।
· गोंद टैंक भरे बफर, बस कोलाइड पर।
· यदि किनारे में एक प्रकाश है, तो रोशनी चालू करें, प्रकाश को कोलाइड को चमकता है। नमूना पिपेट में खींचें।
· स्वचालित पिपेटिंग डिवाइस का उपयोग करना।
· 10-200 म्यू में 1 लिक्विड मूविंग पॉइंट का उपयोग नमूने पर अधिकांश बिंदुओं में किया जा सकता है। बहुत छोटे नमूना छेदों (10μ1 से कम) के लिए, गोंद को अनुक्रमण के लिए उपयोग किया जाने वाला लंबा पिपेट सिर अधिक सुविधाजनक है।

· सैंपल में डूबे हुए पाइपिंग, धीरे -धीरे चलती तरल पदार्थ को घेरते हुए। नमूना ग्लिसरीन के साथ चिपचिपा दिखाई दे सकता है, और तेजी से पंपिंग पिपेट हेड में हवा के बुलबुले खींच सकता है।

· सैंपल पिपेटिंग हेड के बाद, पाइप के किनारे पर द्रव सिर को धीरे से स्थानांतरित कर देगा या बूंदों के बाहर पेपर को पोंछने के तरल सिर को चूसना होगा। नमूना चूसने के लिए सावधान रहें।

नमूना को नमूना छेद में रखें

· पिपेटिंग डिवाइस थोड़ा दबाव रखने के लिए, नमूनों को थोड़ा अधिक प्रवाह तरल सिर को स्थानांतरित करें।
· पिपेटिंग सिर बफर में डाला गया, स्पॉट छेद से थोड़ा अधिक, सकारात्मक दबाव बनाए रखें। पिपेट की नोक को एक छोटे से छेद में डाला जा सकता है।
· धीरे -धीरे और लगातार नमूने बाहर। पिपेट टिप को बिंदु नमूना छेद के ऊपर रखा गया है, और नमूना छेद में डूब जाएगा। नमूना सिंक को धक्का देने के बजाय नमूना छेद को भरने के लिए।
· एक बार तरल सिर के साथ नमूना की अंतिम बूंद, तरल दूसरे पैर में चले जाएंगे, धीरे -धीरे तरल चाल को बढ़ाएंगे, बफर से बाहर निकलें

ऊर्ध्वाधर गोंद नमूने कैसे करें?

· कांच के दो टुकड़ों के बीच वर्टिकल गोंद पॉइंट सैंपल होल। बहुत पतले गोंद में, पिपेट सिर को दो कांच की प्लेटों के बीच भी नहीं डाला जा सकता है। ग्लिसरीन देखो! नमूना छेद पर पिपेट सिर डालें और नमूना छेद में डूब जाएगा।
· पॉइंट सैंपल से पहले, पॉलीप्रोपाइलीन एसाइल जेल सैंपल होल के ऊर्ध्वाधर बिंदु को रखना सुनिश्चित करें कि यह साफ है। सैंपल होल के नीचे दिखाई देने वाले पानी को दूर करें। पानी नमूना छेद को काफी छोटा बना सकता है। 25ml या 50ml सिरिंज और 18-गेज सुई का उपयोग करें। वैद्युतकणसंचलन बफर में डालो और ध्यान से नमूना छेद को फ्लश करें।
· नमूना छेद को देखना मुश्किल हो सकता है, लेकिन उसी पर, बाकी आसान है। यदि अतिरिक्त छेद होते हैं, तो नमूना बफर को ब्रोमोफेनोल ब्लू के साथ परीक्षण किया जा सकता है।